2 курс / Нормальная физиология / Физиология бактерий
.pdf21
Характеристика колоний на плотной питательной среде
22
Унекоторых видов колоний есть свои названия, например:
S-тип колоний (от англ. Smooth – гладкий) – круглые, выпуклые колонии правильной формы с гладкой поверхностью и влажной консистенцией
R-тип колоний (от англ. Rough – шероховатый) – колонии с шероховатой поверхностью, неправильными краями и сухой консистенцией
M-тип колоний (от англ. Mucoid – слизистый) – слизистые колонии
Пигменты бактерий
Окраска колоний может быть связана как с пигментацией самих клеток, так и с выделением окрашенных веществ в питательную среду. Интенсивность образования пигментов зависит от состава питательной среды и условий культивирования микроорганизмов. Если пигмент не растворим в воде, окрашивается только культуральный налет, если же он водорастворим, окрашивается и питательная среда.
|
Пигмент |
|
Цвет |
|
Микроорганизм |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Каротиноиды |
|
|
Красный, |
|
|
Микобактерии, |
|
|
|
|
|
|
сарцины, |
|
||
|
|
|
оранжевый, желтый |
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
актиномицеты |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Хиноновые |
|
Желтый |
|
Микобактерии |
|||
|
|
|
(туберк) |
|||||
|
|
|
|
|
|
|
||
|
Меланиновые |
|
|
Черный, коричневый |
|
|
Бактероиды |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Пирроловые |
|
Ярко-красный |
|
Чудесная палочка, |
|||
|
|
|
актиномицеты |
|||||
|
|
|
|
|
|
|
||
|
Фенозиновые |
|
|
Сине-зеленый |
|
|
Синегнойная |
|
|
|
|
|
|
палочка |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
23
Пересев ЧК на скошенный агар для накопления
24
ТРЕТИЙ ЭТАП БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Изучение ферментативной активности бактерий
Ферменты бактерий
Ферменты – специфические белковые катализаторы, присутствующие во всех живых клетках. Ферментативный спектр является таксономическим признаком, характерным для семейства, рода и
– в некоторых случаях – для видов. Поэтому определением спектра ферментативной активности пользуются при установлении таксономического положения бактерии.
Наличие экзоферментов можно определеить с помощью ДД-сред.
Классификация ферментов
По типу реакции:
1.Оксидоредуктазы: катализируют ОВР
2.Трансферазы: катализируют реакции переноса групп атомов
3.Гидролазы: катализируют гидролиз различных соединений
4.Лиазы: катализируют реакции отщепления от субстрата той или иной химической группы негидролитическими путями с образованием двойной связи или наоборот присоединение химической группы к двойным связям
5.Изомеразы: катализируют внутримолекулярные превращения
6.Лигазы (синтетазы) – катализируют соединение двух молекул, сопряженное с расщеплением пирофосфатной связи в молекуле АТФ.
Конститутивные
Синтез происходит постоянно
25
Генетический
контроль
Индуцибельные |
Репрессибельные |
Синтез индуцируется |
Синтез подавляется в |
соответствующим |
результате избыточного |
субстратом |
накопления продукта |
|
реакции |
По
локализации
|
Экзоферменты |
|
Эндоферменты |
|
|
|
|
||
Выделяются в окружающую среду |
|
Локализуются внутри клетки |
||
|
Большинство – гидролазы => обеспечивают |
|||
|
Отвечают за внутриклеточные |
|||
|
клетку мономерами |
|||
|
|
реакции |
||
|
Ферменты агрессии (гиалуронидаза, |
|
||
|
|
коллагеназа)
Можно определить с помощью ДД сред
26
Дифференциально-диагностические среды
Специальные смеси питательных веществ, применяемые для определения видовой принадлежности микробов и изучения их свойств. При росте бактерий на дифференциально-диагностических средах протекают химические процессы, обусловленные наличием у микробной клетки различных ферментов.
ДДсреды можно разделить на 4 основные группы:
Среды, содержащие белок и выявляющие способность микробов расщеплять белки
(протеолитическим свойства): свернутая лошадиная или бычья сыворотка, молоко
Среды для выявления способности микробов расщеплять углеводы и высокоатомные спирты (Эндо, Левина, «пестрый ряд», Гисса)
Среды, на которых выявляется способность микробов обесцвечивать красители, добавленные к бульону: метиленовый синий, лакмус и др.
Среды, выявляющие способность микробов усваивать вещества, которые не усваиваются другими микробами, например, агар Симмонса - среда с лимоннокислым натрием для отличия кишечной палочки, которая лишена способности
ассимилировать эту среду от других бактерий кишечной группы или среда с олеиновокислым натрией для дифференциации дифтерийной палочки от ложно дифтерийной и дифтероидов.
27
Помимо изучения ферментативной активности с помощью ДД сред для идентификации бактерий определяют ферменты, принимающие участие в процессах получения энергии: каталазу,
нитратредуктазу, оксидазу
Каталаза: расщепляет перекись водорода на молекулярный кислород и воду. Этим ферментом обладают облигантные аэробы и факультативные анаэробы. Для определения каталазы в пробирку с 2мл жидкой бактериальной культуры добавляют несколько капель 3% перекиси водорода. Появление пузырьков газа свидетельствует о наличии каталазы.
Нитратредуктаза: восстанавливает нитрат в нитрит. Определение нитритов проводят крахмалойодной реакцией, основанной на том, что в кислой среде нитриты окисляют йодистый калий с выделением йода, который при взаимодействии с крахмалом дает синее окрашивание.
Для этого культуру выращивают в питательном бульоне с добавлением в него нитрата калия, к 2-3 мл культуры добавляют 1 мл реактива, состоящего из равных объемов 10%-ной серной кислоты и раствора, содержащего в 100мл воды 0,5г йодистого калия и 1г крахмала.
Под действием нитратредуктазы нитрат переходит в нитрит, который вступает в реакцию с йодистым калием и серной кислотой. В результате реакции образуется чистый йод, который в присутствии крахмала дает синее окрашивание.
28
KNO3 → KNO2
2KI + 2H2SO4 + 2KNO2 → 2K2SO4 + I2 + 2NO + 2H2O
Оксидаза: имеется у бактерий с аэробным типом дыхания. Для ее определения на поверхность выросшей на плотной среде бактериальной культуры добавляют несколько капель 1%-ного спиртового раствора альфа-нафтола, 1%- ного водного раствора метола. Появление лиловой окраски свидетельствует о положительной реакции.
Помимо идентификации по биохимическим свойствам, при идентификации кокковых форм бактерий в третьем этапе бактериологического исследования определяют:
Активность плазмокоагулазы (в пробирку с 1мл цитратной плазмы кролика помещают 2-3 петли культуры стафилококка; пробирку помещают в термостат, результат фиксируют на следующие сутки, проверяя образование сгустка);
29
Чувствительность к желчи, антибиотику бацитрацину (для идентификации стрептококков), для чего делают пересев выделенной культуры на кровяной агар, на поверхность которого помещают диски, пропитанные вышеназванными веществами
МЕТОДЫ ВНУТРИВИДОВОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ. ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ МАРКИРОВАНИЕ
Эпидемиологическое маркирование – внутривидовая идентификация бактерий.
ЗАЧЕМ?
Для того чтобы выяснить источник инфекции, понять общий или разные источники инфекции у разных больных с одним и тем же заболеванием.
Одним из методов эпидемиологического маркирования является фаготипирование, при котором определяется фаговар бактерии внутри вида.
Фаговар – представитель бактерии определенного вида, который отличается от других представителей чувствительностью к типовым фагам.
Фаготипирование применяют при стафилококковых инфекциях, брюшном тифе и паратифозных заболеваниях.
Выделение бактерии одного фаготипа от разных больных указывает на общий источник заражения.
30
Методика фаготипирования:
бульонную культуру засевают газоном на чашку Петри с питательным агаром
Чашку подсушивают при температуре 36 градусов в течение 30 минут
Дно чашки расчерчивают на квадраты по числу используемых бактериофагов. В каждый квадрат петлей наносят каплю суспензии соответствующих диагностических, типоспецифических бактериофагов.
После подсыхания капель чашки инкубируют при температуре 37 градусов в течение суток.
После инкубации наблюдают зоны задержки/отсутствия роста бактерий в результате размножения бактериофагов, вызывающих лизис этих
бактерий.
Если картинка на чашках Петри у разных больных будет одинакова, это укажет нам на то, что у данных больных общий источник инфекции.